Une fois que les cellules dans lesquelles nous cultivons

usine de cellulessont contaminés, la plupart d’entre eux sont difficiles à manipuler.Si les cellules contaminées sont précieuses et difficiles à obtenir à nouveau, les méthodes suivantes peuvent être utilisées pour les éliminer.

1. Utilisez des antibiotiques

Les antibiotiques sont plus efficaces pour tuer les bactériesusines de cellules.Les médicaments combinés sont plus efficaces que les médicaments seuls.Les médicaments préventifs sont plus efficaces que les médicaments après contamination.Les médicaments préventifs utilisent généralement un double antibiotique (pénicilline 100u/mL plus streptomycine 100μg/mL).Après contamination, la méthode de nettoyage doit être 5 à 10 fois supérieure à la quantité habituelle.Le médicament doit être utilisé pendant 24 à 48 heures après l'ajout, puis remplacé par la routine habituelle.Fluide culturel.Cette méthode peut être efficace dès les premiers stades de la contamination.Outre la pénicilline et la streptomycine, les antibiotiques utilisés peuvent également inclure la gentamicine, la kanamycine, la polymyxine, la tétracycline, la nystatine, etc. Les antibiotiques couramment utilisés sont 400 à 800 μg/mL de kanamycine ou 200 μg/mL de tétracycline.Le milieu est changé tous les 2 à 3 jours et transmis sur 1 à 2 générations pour traitement.Ces dernières années, il a été rapporté que les antibiotiques 4-fluoro, 2-hydroxyquinoléine (Ciprofloxacine, Cip), dérivé de Pleu-romutiline (dérivé de Pleu-romutiline, BM-Cyclin2 : BM-1 et dérivé de tétracycline (BM-2)) sont efficace pour tuer les mycoplasmes lorsqu’il est utilisé seul ou en combinaison.Ces trois antibiotiques sont tous préparés dans des solutions concentrées 250X dans du PBS et conservés à -20°C pour une utilisation ultérieure.La concentration d'utilisation Cip est de 10 μg/mL, BM-1 est de 10 μg/mL et BM-2 est de 5 μg/mL.Lors de l'utilisation, aspirez d'abord le milieu de culture contaminé, ajoutez le milieu de culture RPMI1640 contenant du BM-1, puis aspirez le milieu de culture après 3 jours, ajoutez le milieu de culture RPMI1640 contenant du BM-2, et cultivez pendant 4 jours, et ainsi de suite pendant 3 jours consécutifs. .tours, jusqu'à ce qu'il soit prouvé par microscopie à coloration fluorescente 33258 que le mycoplasme a été éliminé, puis un milieu de culture normal est ajouté pour la culture et le passage 3 à 4 fois.

2. Traitement thermique

L'incubation d'une culture de tissus contaminés à 41 °C pendant 18 heures peut tuer les mycoplasmes, mais a des effets néfastes sur les cellules.Par conséquent, un test préliminaire doit être effectué avant le traitement pour explorer le temps de chauffage qui peut tuer au maximum les mycoplasmes et avoir le moins d’impact sur les cellules.Cette méthode est parfois peu fiable.S'il est d'abord traité avec des médicaments puis chauffé à 41°C, l'effet sera meilleur.

3. Utilisez du sérum spécifique aux mycoplasmes

La contamination par les mycoplasmes peut être éliminée avec 5 % d’immunsérum de mycoplasmes de lapin (titre d’hémagglutination 1:320 ou supérieur).Parce que l’anticorps spécifique peut inhiber la croissance des mycoplasmes, il devient négatif 11 jours après le traitement antisérique et reste négatif 5 mois plus tard.est négatif.Cependant, cette méthode est plus gênante et n’est pas aussi pratique et économique que l’utilisation d’antibiotiques.

4. Autres méthodes

Outre les méthodes mentionnées ci-dessus pour éliminer la contamination, il existe également des méthodes d'inoculation et de stérilisation chez les animaux, des méthodes de phagocytose des macrophages, des méthodes d'ajout de bromouracil aux substances contaminées.bouteilles de culturepuis en les irradiant avec de la lumière, des méthodes de filtration, etc., mais elles sont toutes plus gênantes et inefficaces.Par conséquent, une fois qu’une contamination par des mycoplasmes se produit, à moins qu’elle ne présente une valeur particulièrement importante, elle est généralement jetée et remise en culture.

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